Правильная терапия муковисцидоза - основа качественной жизни ваших детей

Сравнение методов редактирования CRISPR Cas9 и Cas12a для исправления мутации W1282X

Мутация W1282X встречается в разных регионах мира. Предполагают, что мутация W1282X произошла в результате единичного мутационного события в популяции ближневосточных евреев до их переселения в Европу. Наибольшей величины ее частота достигает в популяции евреев-ашкенази Израиля (до 50% мутантных аллелей у больных с МВ). Распространение мутации W1282X в других регионах Европы и мира связывают с расселением евреев-ашкенази. Относительно высокая доля этой мутации наблюдается в регионах с высоким уровнем урбанистического населения. Аналогичную тенденцию можно наблюдать и в России: в Москве – 2,93%, Смоленске – 2,94%, Новосибирске – 2,56%, Кемеровской области – 2,17%. Интересным фактом является недавно обнаруженная высокая доля мутации W1282X у больных МВ карачаевцев (18 из 20 аллелей, 90%). Частота мутации W1282X в выборке здоровых карачаевцев из Карачаево-Черкесии составила 1,8% (6/660 хромосом). Проникновение мутации W1282X на Восточный Кавказ можно связать с миграцией евреев из Византии через северное Причерноморье или Грузию в раннем средневековье, или через Персию, или Иран в позднем средневековье. Высокую долю мутации W1282X в этой популяции можно объяснить эффектом основателя. Кроме «урбанистической» привязанности также очевиден вектор распространения мутации W1282X с юга на север – с максимальной концентрацией в кавказских республиках (в частности, в Карачаево-Черкесии) и минимальной встречаемостью в регионах севернее Москвы.

Источник. https://www.litres.ru/

W1282X – по положению в кодирующей последовательности обозначается c.3846G>A, а по по положению в молекуле белка p.Trp1282X. Эта мутация относятся к 1 классу первичного повреждающего эффекта и является «тяжелой». При такой мутации белок CFTR вообще не синтезируется или синтезируется в усеченном виде и сразу деградирует, потому что в гене произошла замена кодирующего аминокислоту кодона на стоп-кодон, или сдвиг рамки считывания, или появился сигнал неправильного сплайсинга. При мутациях 1 класса фиксируется выраженное поражение поджелудочной железы.

Метод исследования.

В исследовании сравнили способность к редактированию Cas9 или Cas12a. для исправления мутации W1282X в клеточной линии CFF-16HBEge W1282X.

Полученные результаты

Cas9 показывает более высокие уровни коррекции, чем Cas12a as, путем электропорации клеток с Cas9 RNPs и донора ssODN, было достигнуто почти 18% точного редактирования по сравнению с всего 8% для Cas12a. Такие уровни коррекции увеличивают количество мРНК и частично восстанавливают функцию CFTR в пуле редактируемых клеток до 18%.

Заключение

В целом, эта работа демонстрирует потенциал редактирования генов как терапевтическую стратегию при МВ, напрямую устраняющую первопричину заболевания.

Источник. https://www.cysticfibrosisjournal.com/

0

Автор публикации

не в сети 7 дней

Юстас

Аватар 15
Комментарии: 7Публикации: 386Регистрация: 01-07-2019

Добавить комментарий

Авторизация
*
*
Регистрация
*
*
*
Генерация пароля